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常见发光免疫分析技术的比较
更多相关文章    时间:2010/5/20 9:58:00,点击:0

       2.3.3 其它物质的检测:还可对其他一些微量物质进行测定,如维生索、叶酸、免疫球蛋白及酶类,人免疫球蛋白、人血清清蛋白、人中性粒细胞溶菌酶、葡萄糖和除草荆等。

       2.4 评价:电化学发光是一种电促发光技术,采用的是特殊的化学发光剂Ru(bpy)3+作为标记物并在发光反应中循环使用,既避免了同位素的半衰期短及放射蚀危害,又克服了酶标记的不稳定性,而标记物很稳定,在室温下半衰期大于1年;同时还结合了90年代初期问世的链霉亲和素的新型固相技术,不但使检测的融敏度大大提高,而且还可自动分离游离相和结合相,使检测更易实现自动化。电化学发光的反应时间仅为20 min,而且标准曲线储存在条码中,每次测定只需一点标定,Ru(bpy)3+的稳定性很好,在室温下半衰期长达1年。这些优点决定了操作的快速、简捷,无需经常校正。

       因此该技本与其它的分析手段比较,在免疫学检测中有显著的优势。它的优点除了灵敏度高、特异性强、检测快速外,更为可取的是所用试剂毒性低,无放射性危害,并且有良好的稳定性。以最易受影响的促甲状腺素为例,35℃3周后,电化学发光试剂仍然稳定。电化学发光分析方法多样,适用面较大,广泛地应用于抗原、半抗原和抗体的免疫梭测。其线性范围也较宽,符合临床检验的需要。耐它与普通的化学发光比较,前者为电促发光,在电极表面通过三角形脉冲电压的激发产 生稳定、连续、高效的发光,后者则是标记辣根过氧化物酶作用下催化化学发光剂(如鲁米诺、吖啶酯等产生不稳定、间断、闪烁性的发光),基反应过攘中容易发 像裂变恧使结果不稳定。电亿学发光测定的照光度裰据释放光子的波长仍属荧光测定酶范畴,但与直接的荧光发光不同,荧光发光的灵敏度受荧光发光的本底和光学部件散射光的影响,适应范围也较低。

       电化学发光技术的发展趋向在于合成新的发光标记物、优化标记技术和免疫分析方法,从而追踪生命科学发展的前沿领域,建立对生命过程有重要意义的内源性和外源性物质的分析方法。

       2.5 代表仪器:目前生产电化学发光仪的厂家较少,主要生产厂家是瑞士罗氏诊断公司,与德国BoehringerMannheim宝灵曼公司公司合 作,Elecsysl0lO/20lO,ROCHE 2010系列全自动电化学发光免疫分析仪(ORIGEN分析仪)。标本可随时插入常规操作中并优先测试,也为临床急诊测定提供了方便。

       3、时间分辨荧光

       3.1 时间分辨荧光免疫分析(TR-FIA)TR-FIA是将三价稀土镧系离子铕(Eu),钐(Sin)等通过络合物标记到抗原或抗体分子上,并通过检测其荧光实现免疫分析。由于稀土离子荧光的激发光波长范围较宽,而发射光波长范围较窄,而且激发光和发射光之间的波长差距较大,特别是荧光寿命大大长于常规荧光。因此它采用了与常规荧光免疫不同的检测方式,即通过脉冲激光器间歇激发样品,同时检测器在其激发的间隙测定特定波长的荧光强度。这样不仅消除了杂散光的干扰,而且也大大减弱了样品及反应杯中杂质所产生的背景荧光干扰。所以其检测灵敏度和线性范围大大高于常规荧光。

       3.2 解离增强时间分辨荧光免疫分析法(DELFIA) 由于稀土离子在水相中的荧光效率很低,因此需要将其包裹在一个非水相的环境中才能检测到理想的荧光强度。最常见的做法是在检测前先用酸将稀土离子从标记抗原或抗体七解离出来,由一系列表面活性剂构成的微囊吸收并包裹稀土离子,这种方式称为DELFIA,其中的酸和表面活性剂等被称为增强剂。迄今为止,在所有的时间分辨荧光免疫分析法中,这种方法的灵敏度是最高的,因此近年来得到了广泛应用,已经成为目前最常见的时间分辨免疫分析技术。

       3.3 直接时间分辨荧光测嚣法由于该方法需要在常规免疫分析中的洗涤步骤后还要进行荧光素的解离和增强操作,因此分析步骤有些冗长繁琐。时间分辨荧光免疫分析最大的不足是环境及样品中同类元素导致的本底干扰。作为稀土资源大国的中国,这一点尤其不容忽视,特别对北方地区更为重要。虽然可以通过实验用水和实验室环境的特殊净化杜绝一部分干扰,但会带来运行成本的提高;况且由于患者体内这类元素的积累而造成的临床标本污染根本无法消除。因此人们研究开发了另一种称为直接时间分辨荧光测量法的技术,也有人称之为后标记技术。它首先使用一种不含稀土元素的特殊络合物标记抗原或抗体,等常规免疫分析中的洗涤完成后,再加入稀土元素并进行测定,这样就基本掩蔽了同类元素导致的本底干扰。但其灵敏度较低,目前还不能与上述两种方法相抗衡。除上述方法外,还有一种固 相时间分辨荧光法,它是使用一种特殊的络合物将三价稀土离子标记到抗原或抗体分子上,同时该络合物还可以维持三价稀土离子周围的非水相环境,因此也充当了增强剂的角色。该方法的特点是无需增强剂,故操作简单,但灵敏度度低于上述DELFIA。

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