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常见发光免疫分析技术的比较
更多相关文章    时间:2010/5/20 9:58:00,点击:0

       1.4.3 美国贝克曼库尔特公司AccessOR全自动微粒子化学发光免疫分析系统。采用ALP-AMPPD发光系统,以微粒子作为载体,表面积大、结合快、达到最大发光信号时间短、反应及分离速度快,缩短了分析时间,有效提高了灵敏度和准确性。该系统可全自动控制整个测定和数据分析处理,具有批量和任选测定24个项目的能力和急诊插入功能,平均检测速度100/h。冷藏试剂盘可放24种试剂,探针直接插入试剂盒并自动封闭,直至试剂用完,不污染不浪费。超声波技术被用于搅拌使微粒悬液混均匀并加速反应,用于探针取样液面检查保证取样准确,用于洗涤时减少交叉污染。使用AccessOR的用户还可以申请Internet全球通讯网络,进行通讯查询。AccessOR独特的塑料智能化外形设计,使其从外观到内在品质,给人们留下深刻的印象。

       1.4.4 美国DPC公司全自动化学发光免疫分析仪IMMULlTE,以ALP为标记物,以金刚烷作发光底物,测定灵敏度相当于10负21mol/ml的酶,采用聚苯乙烯珠作载体,其检测水平已能达到10负12g/ml。目前能够检测性腺类、甲状腺功能类、肿瘤标记物类、传染病类、细胞因子类、血液病类、糖尿病类、肾上腺功能类、治疗药物类、成瘾药物类、短肽及其他分析物类,还能提供象肌钙蛋白(TNI)这类急诊项目的快速诊断试剂盒。

       2、电化学发光分轿

       2.1 电化学发光

       2.1.1 电化学发光的原理是对电极施加一定的电压进行电化学反应,反应的产物之间或与体系中某种组分发生化学发光,用普通光学手段测髓发光光谱军Ⅱ强度从丽对物质进行衡量分析的一种方法。与化学发光有所不同,其差异在予氧化反应是通过电极上的电化学反应产生的,而不是氧化剂或发光剂自身内氧化产生,其标记物为三联吡啶钌及其衍生物Ru(bpy)3 2+,并以三丙胺(TPA)为还原荆。如图1所示,Ru(bpy)32十穰TPA分剃在弼投袅嚣氧化成Ru(bpy)3 3+搬TPA的阳离子自由基IPA+,IPA+迅速脱去一个质子形成TPA自由基,TPA具有强的还原性,从而把Ru(bpy)3 3+还原为激发态的Ru(bpy)3 2+,后者发射一个620 nm的光子回到基态再参与下一次电化学发光。必需0.01毫秒就可发出稳定的光,每毫秒几十万次的循环电化学发光,大大提高了分析的灵敏度。另外,通过电极反应在线制备了不稳定的发光剂Ru(bpy)32+缈程TPA,避免了直接使用Ru(bpy)3 2+对分析测试的影响。

       2.1.2 电纯学发光的主要特点是发光过程中的标记物基本不被消耗,丽反应体系中其他成分充分过量,因此发光倍号强而稳定,且发光时间较长。其缺点为测量方式复杂、仪器成本及维护费用高;同时环境及样品中同类元素也存在较弱的本底干扰。反复使用的流动池可能导致交叉污染;而冲洗或进样中产生的气泡也会干扰测定;同时繁琐冗长的冲洗过程也会成为提高检测效率的瓶颈。另外使用磁性或非磁性微粒时,强烈的散射吸收作用也会降低灵敏度。

       2.2 免疫电化学发光分析:集电化学发光、生物素一抗生物索、免疫分析和由固相免疫分析发展起来的磁微球等技术于一体,是众多学科交叉的研究领域。

       免疫学的核心问题是抗原一抗体的特异性结合,主要采用固相的方法,即将抗原或抗体固定到磁微球上,经免疫反应后,在固相载体磁微球上形成抗原一抗体复合物,外加磁场沉降这种复合物,然后洗涤除去多余或游离的抗体或抗原,然后进行电化学发光测定。与一般免疫反应类似,可分为直接法、双抗体夹心法和竞争法。

       2.3 免疫毫纯学发光鹣瘟曩毫纯学发光综合了光学、电子学、生物学、免疫学和计算机,禚临床中可糟予以下几个方面。

       (1) 蛋白质和激素测定:电化学发光技术在激素的测定中有替代放射免疫的趋势。可检测甲状腺激素、促甲状腺激索、性激素、雌二醇、促卵泡激索、促黄体激索、人绒毛膜促性腺激素、胰岛素、胰岛素样生长因子、甲状腺降钙素、肿癌标志物、前列腺特异性抗原、肌钙蛋白、甲胎蛋白、癌胚抗原、肿瘤坏死因子、r干扰素、人体肿瘤相关糖蛋白、自细胞介素系列等。

       2.3.1 毒素与病毒抗原分析:如肉毒杆菌毒索、蓖麻蛋翻、霍乱亚基和葡萄球菌肠毒素等,检测限达10负-15g。还有炭疽杆菌芽孢、伤寒沙门菌、鼠疫抗原等沙门菌和。O一157病毒等。

       2.3.2 DNA/RNA核酸序列分析:在核酸分析中利用电化学发光技术将Ru(bpy)3+标记引物或探针进行DNA杂交分析或聚合酶链反应,是实验室定量分析标 本中核酸含量的一种有发展前景的检测方法。该技术述可用于检测乙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒等其他致病性病毒和病原微生物。

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