|
|
| |
|
| |
| |
| 健康人与肥胖、糖尿病和甲亢病 |
|
[ 2008-4-14 16:26:00 | By: yzh ] |
| 王学晶 徐国宾 朱立华
（北京大学第一医院检验科 100034） 摘要：目的 研究resistin在正常人与肥胖、糖尿病、甲状腺机能亢进病人中的平均水平，并加以比较。方法 采用竞争性ELISA方法测定上述人群血浆中的resistin水平。结果 resisti n在不同年龄组之间的差异无统计学意义(P>0.05)，在不同性别组间的差异也无统计学意义(P>0.05)；正常组与肥胖组、糖尿病组、甲亢组 之间的差异都有统计学意义(P<0.001),肥胖组与糖尿病组、甲亢组之间的差异也都有统计学意义（P<0.002），糖尿病组与甲亢组的差异无统计学意义(P>0.5)。结论 resistin在正常组、肥胖组、糖尿病组的水平有递增的趋势，支持Steppan的假说，resistin所致的胰岛素抵抗可能是将肥胖与糖尿病连接在一起的纽带；甲亢组resistin的高水平对解释某些甲亢病人出现胰岛素抵抗具有新的意义。
关键词：resistin 胰岛素抵抗
Abstract: Objective To study and compare the level of resistin in healthy volunteers, obesities, diabetes mellitus and hyperthyroidism. Method A competitive ELISA was used to test resistin in plasma. Result No statistical difference was found among age groups and between male and female(P>0.05). Resistin level in healthy volunteers had a statistical difference with that of obesities, diabetes mellitus and hyperthyroidisms(P<0.001), this was also found while comparing resistin level of obesities with that of diabetes mellitus and hyperthyroidisms(P>0.002). But there was no difference between diabetes and hyperthyroidism (P>0.5). Conclusion There is a increasing trend in the resistin level in healthy volunteers, obesities, diabetes mellitus and hyperthyroidisms, orderly. This result supports the hypotheis of Steppan that resistin links obesity to diabetes; and the high level of resistin in hyperthyroidism can help to explain the phenomenon of insulin resistance existing in such kind of patients.
Keywords: resistin insulin resistance
Resistin（resistance to insulin）是新近发现的一种由脂肪细胞分泌的激素，目前被认为在从肥胖发展为糖尿病的过程中因能够对抗胰岛素而发挥着重要作用[1]。动物试验表明[1]，体内注射resistin可以减少胰岛素诱导的脂肪细胞吞噬葡萄糖；而加入resistin抗体则可以中和resistin，加强胰岛素-葡萄糖之间的相互作用和加强胰岛素诱导的脂肪细胞吞噬葡萄糖。 resistin具有令人感兴趣的生物学性质，有可能为改善胰岛素抗性提供新的选择，有广泛的研究和应用前景。
目前国际上对resistin的研究还仅限于动物试验，关于人类 resistin的研究尚未见报道。我们首次测定了97例正常成人、72例2型糖尿病病人、20例肥胖病人和87例甲亢病人血浆的resistin水平，以期观察resistin在这些人群中的分布情况。
实验材料：
1． 标本来源：97例（男性49例，女性48例）正常成人血浆获自体检单位，各项体检指标均属正常（心、肺、消化系统、泌尿系统体检均无异常，无糖尿病、甲亢病史。血糖、尿素、谷丙转氨酶水平正常）。72例2型糖尿病、20例肥胖病人（除外糖尿病）和87例甲状腺机能亢进病人标本（均为未经治疗的初发患者）由本院内分泌科提供。血浆均采用EDTA抗凝，并加入抑肽酶防止 resistin 被降解。
2． 仪器和试剂：
Resistin试剂盒：由PHOENIX PHARMACEUTICALS，INC公司提供。采用竞争性免疫测定方法。
3．实验步骤：
① 将试剂盒内的试剂在室温下平衡1小时，并按照说明书的要求配置标准液、一抗、生物素化一抗和SA-HRP。
② 血浆标本在使用前应用缓冲液稀释16倍。取样本/标准50ul加入反应板，再分别向每孔内加入25ul一抗和25ul生物素化一抗（空白孔不加），混匀，封板，室温下放置2小时。
③ 每孔加300ul缓冲液，清洗反应板，反复清洗5次（空白孔不加缓冲液），拍干。
④ 每孔加100ul SA-HRP（空白孔不加），室温下放置1小时。
⑤ 每孔加300ul缓冲液，清洗反应板，反复清洗6次（空白孔不加缓冲液），拍干。
⑥ 每孔加100ul底物液，室温下放置1小时。
⑦ 每孔加100ul 2N HCL（终止液），应用DYNATECH型酶标仪（天津生产）在450nm处测定OD值。
⑧ 采用四参数拟合标准曲线。以浓度的对数为横坐标，OD值为纵坐标作出标准曲线，再根据OD值计算出每孔的resistin 浓度。
实验结果：
1． 正常人群的resisitin测定结果见表1。
表1 正常人群的resisitin测定结果
| 例数 |
|
Resistin (均值±标准差 ng/ml) |
P |
| 20-30岁 (min,max) |
31-40岁 (min,max) |
41-50岁 (min,max) |
51-60岁 (min,max) |
61-70岁 (min,max) |
|
| 男 |
49 |
7.1±14.9 0.03, 33.31 |
9.0±13.0 0.08, 69.84 |
10.7±11.8 0.02, 138.2 |
32.2±30.5 0.08, 125.3 |
42.8±45.8 7.15, 58.15 |
0.09*1 |
| 女 |
48 |
7.0±11.1 0.18, 43.08 |
16.5±24.7 0.08, 35.52 |
23.4±47.2 0.14, 27.47 |
18.4±20.3 0.05, 99.65 |
27.1±16.3 0.6, 143.3 |
0.475*2 |
| 总计 |
97 |
|
|
|
|
|
0.234*3 | *1：男性5个年龄组间比较
*2：女性5个年龄组间比较
*3：并组后，男性和女性2组之间比较
2． Resisitin在正常人、肥胖、2型糖尿病、甲亢组平均水平的初步比较，见表2。
表2 正常人、肥胖、2型糖尿病、甲亢组Resisitin平均水平的初步比较
| 组别 |
例数 |
均值(ng/ml) |
SD(ng/ml) |
最小值(ng/ml) |
最大值(ng/ml) |
P值 |
| 正常对照组 |
97 |
20.5 |
28.5 |
0.02 |
143.3 |
<0.001*4 |
| 肥胖组 |
20 |
70.9 |
68.0 |
0.04 |
228.1 |
<0.002*5 |
| 2型糖尿病组 |
72 |
164.4 |
137.9 |
0.78 |
584.2 |
>0.5*6 |
| 甲亢组 |
87 |
157.6 |
142.8 |
0.02 |
683.2 |
| *4：正常组与肥胖组、糖尿病组、甲亢组之间比较
*5 ：肥胖组与糖尿病组、甲亢组之间比较
*6：糖尿病组与甲亢组之间比较
3． 统计学处理：
正常人群不同年龄组之间的统计采用秩和检验。从表中可以看到，随年龄的增长resistin有增高的趋势，但由于个体间差异较大（SD较大），但尚无统计学意义，故并组进行性别间比较。并组后性别间的统计采用t检验，同样也无显著性差异，故将男女合并，重新计算均值、SD。
正常组与肥胖组、糖尿病组、甲亢组间的比较采用秩和检验。结果显示， resisitin在不同组间的差异有统计学意义，进一步做组间比较，发现除了2型糖尿病和甲亢组之间无统计学差异外（p>0.5），其他任何2组间resistin差异均有统计学意义（P<0.01）。由此可以得出结论：肥胖组、2型糖尿病组和甲亢组的resistin平均水平高于正常对照组；2型糖尿病组和甲亢组的resistin平均水平高于肥胖组，2型糖尿病组和甲亢组的resistin平均水平接近。
讨论：
Resisitin是由Steppan[1]等人在研究一类抗糖尿病新药thiazolidinediones(TZDs)的作用机制时发现的。这类新药可以增强靶组织对胰岛素的敏感性，从而降低血糖水平。Steppan观察到，在应用TZD s后脂肪细胞内出现了一个发生下调的基因，从而发现了resistin。进一步的研究发现[2，3，4]，Resistin 是一个由脂肪细胞特异性分泌的，分子量为12.5kD，约含有105-114个氨基酸的小分子蛋白，有三个功能区：N末端为信号序列，中间为可变区，以一段富含半胱氨酸的序列作为C末端，其中含有一段高度保守序列，为C-X11-C-X8-C-X-C-X3-C-X10-C-X-C-X-C-X9-CC-X3-6。Resistin通常以二聚体的形式存在。Steppan[6]等人还发现在小鼠和人体内存在着一个resistin样分子的家族（resistin-like molecules,RELMs），其中RELMα具有严格的脂肪组织特异性，而RELMβ则是由胃肠道分泌，在增殖的上皮细胞和肿瘤细胞中的表达量很高。
Resistin的生理作用目前还不明确，对动物的研究表明[1]，给小鼠喂食高脂饮食可以引起resistin水平的升高；另外，在具有肥胖遗传特质的ob/ob小鼠和糖尿病遗传特质的db/db小鼠中，也可以见到resistin水平高于正常小鼠。 小鼠腹腔内注射resistin可以导致血糖水平升高而胰岛素水平没有显著变化，故推测这种糖耐量功能的降低不是因为胰岛素的缺乏，而是产生了胰岛素抵抗；而注射resistin抗体可以使这个胰岛素抵抗模型小鼠的血糖恢复到实验前水平，且胰岛素的敏感性也明显升高。这些便是resistin可能具有胰岛素抵抗作用的证据。但也有相反的实验结果。James[5]等人的实验结果表明，ob/ob和db/db小鼠resistin的水平比正常小鼠低；在具有胰岛素抵抗的小鼠遗传模型中resistin水平是降低的；另外，在给ZDF(Zucker diabetic fatty)大鼠应用PPARγ拮抗剂后，其resistin的水平升高。我们在人群中测定resistin的结果与Steppan等人的小鼠动物试验相近。将正常组与肥胖组、糖尿病组、甲亢组的均值加以比较，发现resistin的水平在正常对照组、肥胖组和糖尿病呈一个递增的趋势，这一结果似乎支持Steppan等人的结论：resistin 所致的胰岛素抵抗可能是将肥胖与糖尿病连接在一起的纽带；而甲亢组resistin的高水平对解释某些甲亢病人出现胰岛素抵抗可能具有新的意义。
实验中发现，resistin 在各种人群中分布的一个共同的特点是：各年龄组的均值有随年龄增高的趋势，但是由于个体差异非常大，而导致在统计学处理时没有显著性差异。这个结果使得我们很难确立每组人群resistin的范围。由于资料有限，故其在健康人群中的分布状况还需进一步观察。实验进一步提示，在今后的实践中是否还需考虑有体脂或脂代谢因素的影响。 希望通过更为严格的健康人标本获取和加大样本量来确立resistin在健康人群中的分布特点，并对人体resistin确切的生理功能、抗糖尿病药物TZDs对于resistin的影响进行更深入的研究。
参考文献：
1． Claire M.Steppan et al. The hormone resistin links obesity to diabetes. Nature 409,307-312(2001)
2． Claire M.Steppan et al. A family of tissue-specific resistin-like molecules. PNAS 98,502-506(2001)
3． Ronadip R. Banerjee & Mitchell A. Lazar. Dimerization of resistin and resistin-like molecules is determined by a single cysteine. JBC, in press.(2001)
4． Kim K.H. et al. A cysteine-rich adipose tissue-specific secretory factor inhibits adipocyte differentiation. J. Biol. Che(276)14-11252-11256(2001)
5． James M. Way et al. Adipose tissue resistin expression is severely suppressed in obesity and stimulated by PPARγ agonists. JBC, in press.(2001)
|
|
| | |
|
