参加室间质评的单位数量足够大则FQ-PCR检测所得到的数据必然呈正态分布吗?
当Poisson分布总体均数λ=20时,Poisson分布已接近正态分布;当λ=50时,可以认为Poisson分布呈正态分布。
对应于室间质量评价活动,当评价质控物靶值(Target Value ,T)大于50拷贝/1μl时,参评单位一次抽样测定值的分布才呈正态分布。对于Poisson分布的正态近似条件,容易错误地理解为:“如果在试剂、方法和测定操作上没有问题,而且参加室间质评的单位数量足够大,则所得到的数据(或转换,如对数值)必然呈正态分布。”因为参加室间质评的单位数量足够大,并不能增加抽样单位内DNA的拷贝数,当T小于20拷贝/1μl时,无论参加室间质评的单位数量大到多大,其测定值始终呈Poisson分布。
参加室间质评的单位数量足够大,只是让所得到的数据更接近其真实分布。要使室间质量评价时FQ-PCR检测结果的真实分布向正态分布逼近,就要使室间质量评价样本的总体均数λ增加至大于20。当T小于20拷贝/1μl时,可增加反应管中DNA模板的体积(如由加2μl改为加20μl)或使单位体积内DNA拷贝数增加(如对样本进行DNA浓缩),使FQ-PCR检测结果的分布接近正态分布。
定量PCR检测结果的统计学特征