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细胞培养技术中的关键因素
更多相关新闻    时间:2012/3/13 9:39:50,点击:0

        细胞培养技术中的关键因素-细胞操作功夫在手!

        一、准备工作对开展细胞培养异常重要,推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒,培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌,无菌室或超净台的清洁与消毒,培养箱及其他仪器的检查与调试等。

        1.清洁、消毒、液体

        直接接触细胞的用品要超净处理--无非必须分子
        直接接触细胞的用品要彻底消除微生物
        超净和消毒过的样品要绝对密闭保存,标记消毒时间
        实验室保持洁净,随时消毒
        尽量采用商品化一次性用品
        操作者也要清洁和消毒
        缓冲液要符合生理渗透压(280~310 mOsm)和pH(7.2~ 7.4 )

        2.玻璃器皿超净

        去污剂煮沸30min(超声波震荡30min) 温水刷洗 流水冲洗 酸性洗涤液浸泡 流水冲洗 蒸馏水冲洗 纯水漂洗 在洁净温箱中烤干 密封消毒

        3.消毒

        干热--玻璃器皿  160℃,120min
        湿热(高压,120 ℃ )  10~20磅,20~30min
        紫外线--空气
        消毒剂--场面
        微孔过滤--液体  0.22um、0.45um

        二、细胞生长的条件和培养基要求:选择合适的培养基,保证全过程的无菌

        细胞的营养需要:氨基酸、维生素、碳水化合物、无机离子、蛋白质、促生长因子。其中很多成分系用血清、胚胎浸出液等提供,在很多情况下还需加入10%的胎牛或新生牛血清。

        培养基的制备:a..浓度要准-渗透压、b. 酸碱度要适宜-酸度计
        细胞的生存环境:a.. 温度、b.气相、 c.渗透压--290mmol/L

来源:检验医学在线

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